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凝胶的样品溶液的处理
样品溶液如有沉淀应过滤或离心除去,如含脂类可高速离心或通过Sephadex G-15短柱除去。样品的粘度不可大,含蛋白为超过4%,粘度高影响分离效果。上柱样品液的体积根据凝胶床体积的分离要求确定。分离蛋白质样品的体积为凝胶床的1-4%(一般约0.5-2ml),进行分族分离时样品液可为凝胶床的10%,在蛋白质溶液除盐时,样品可达凝胶床的20-30%。分级分离样品体积要小,使样品层尽可能窄,洗脱出的峰形较好。(五〉防止微生物的污染交联葡聚糖和琼脂糖都是多糖类物质,防止微生物的生长,在凝胶层析中十分重要,常用的抑菌剂有:
1)叠氨钠(NaN3)在凝胶层析中只要用0.02%叠氮钠已足够防止微生物的生长,叠氮钠易溶一水,在20℃时约为40%;它不与蛋白质或碳水化合物相互作用,因此叠氮钠不影响活力;不会改变蛋白质和碳水化合物的层析我特性。叠氮钠可干扰荧光标记蛋白质。2可乐酮[Cl3C-C(OH)(CH3)2]在凝胶层析中使用浓度为0.01-0.02%。在微酸性溶液中它的杀菌效果佳,在强碱性溶液中或温度高于60℃时易引起分解而失效。
3)代疏基水杨酸钠在凝胶层析中作为抑菌剂使用浓度为0.05-0.01%。在微酸性溶液中为有效。重金属离子可使代疏基的物质结合,因而包含疏基的蛋白质可在不同程度上降低它的抑菌效果。
(4)代盐在凝胶层析中使用浓度为0.001-0.01%。在微碱性溶液中抑效果佳,长时间放置时可与卤素、根离子作用而产生沉淀;还原剂可引起此化合物分解:含疏基的物质亦可降低或抑制它的抑菌作用。
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举例说明什么是弹性和非弹性凝胶?
由柔性的线性大分子物质,如洋菜吸附水蒸气先为单分子层吸附,然后转变为多分子层吸附,硫化橡胶在苯蒸气中的吸附则是从一开始即为多分子层吸附。
这类凝胶的干胶在水中加热溶解后,在冷却过程中便胶凝成凝胶。
如明胶、纤维素等,在水或水蒸气中都发生吸附。不同的吸附体系,其吸附等温线的形状不同,弹性凝胶的吸附与解析通常会形成较窄的滞后圈。
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凝胶形成的方法有哪几种?
改变温度转换溶剂加电解质进行化学反应5.凝胶的结构分为哪4种类型?
A球形质点相互联结,由质点联成的链排成三维的网架Ti02、Si02等凝胶。
B棒状或片状质点搭成网架,如V205凝胶、白土凝胶等。
C线型大分子构成的凝胶,在骨架中一部分分子链有序排列,构成微晶区,如明胶凝胶、棉花纤维等。
D线型大分子因化学交联而形成凝胶,如硫化橡胶以及含有微量:二乙烯苯的聚都属于此种情形。
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